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細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
B16-F1
1×106
P-X9999
產品詳情：
細胞別稱：B16/F1; B16 F1; B16F1
種屬來源：小鼠
年齡性別：不詳
組織來源：皮膚
生長特性：貼壁生長
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
背景簡介：B16-F1細胞是B16-F0細胞的亞系，源自黑色素瘤C57BL/6J荷瘤小鼠的皮膚；B16-F1細胞可產生黑色素。
生物等級：1
細胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測：無
基因表達情況：
保藏機構：ATCC; CRL-6323 ECACC; 92101203
培養(yǎng)基：RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無血清凍存液，液氮儲存
倍增時間：
STR鑒定位點18-3：15,16；6-7：15；5-5：16,20；X-1：28；1-2：19,20；7-1：26.2；8-1：16,17；1-1：17,18；19-2：13；15-3：22.3,23.3；12-1：17,18；6-4：18,19；4-2：20.3,21.3；3-2：14,15；2-1：16；13-1：17.1,18.1；11-2：16,17；17-2：15,16,17；
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產品：
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BCL2樣12含脯氨酸蛋白抗體 BCL2L12 |
磷酸化活化復制因子2重組兔單克隆抗體 |
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CD20樣蛋白1抗體 CD20L1/MS4A4A |
驅動蛋白結合蛋白1抗體 Anti-TRAK1 |
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酪氨酸磷酸酶受體相互作用蛋白Liprin α4抗體 PPFIA4 |
CCDC38 |
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磷酸二酯酶9A抗體 PDE9A |
卷曲螺旋結構域蛋白38抗體 |
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過氧化物酶體**蛋白5相關蛋白抗體 Anti-Peroxin 5R/PEX5-related protein |
phospho-ATF2 (Thr71) |
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蛋白質磷酸酶2A亞基3抗體 Anti-PPP2R3 |
Rabbit Anti-Mink IgG H&L / RBITC |
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S100P結合蛋白抗體 Anti-S100PBP/S100P binding protein |
eIF4GII蛋白抗體 |
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羅丹明標記的兔抗水貂IgG H&L |
eIF4GII |
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大鼠Ⅰ型前膠原C末端肽(CTX-Ⅰ)elisa分析檢測試劑盒 |
鋅指蛋白300抗體 Anti-ZNF300 |
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CTX-Ⅰ ELISA Kit |
磷酸化細胞核因子/k基因結合核因子p100抗體 Anti-Phospho-NFKB2(Ser866+Ser870) |
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人富組蛋白(histatin-5)elisa分析檢測試劑盒 |
Ras相關區(qū)域家族1A抗體 Anti-RASSF3 |
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Humanhistatin5ELISAKit |
分選連接蛋白5抗體 Anti-SNX5 |
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人丙二酸單酰輔酶A(malonyl CoA)elisa檢測試劑盒免費代測 |
小鼠趨化因子C-X-C-基元配體16(CXCL16)elisa檢測試劑盒 |
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組織CDK2/CYCLIN A激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） |
B16-F1 小鼠黑色素瘤細胞大鼠核因子κB受體活化因子配基(RANKL)elisa檢測試劑盒 |
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甲基樣蛋白15抗體 |
1號染色體開放閱讀框162抗體 |
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METTL15/METT5D1 |
C1orf162 |
實驗步驟：
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉染前24 h進行細胞鋪板，轉染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉細胞系。