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PCR反應(yīng)?陰性對(duì)照出現(xiàn)明顯擴(kuò)增分析

日期:2025-04-30 13:07
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摘要: PCR反應(yīng)陰性對(duì)照出現(xiàn)明顯擴(kuò)增 1、 反應(yīng)體系組分(如水)被污染:實(shí)驗(yàn)過程中,更換新的Mix或者水重復(fù)實(shí)驗(yàn)。 2、 標(biāo)本間的交叉污染或產(chǎn)物污染:反應(yīng)體系在超凈工作臺(tái)內(nèi)配制,對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行嚴(yán)格的區(qū)分,減少氣溶膠污染;使用帶濾芯的槍頭。 3、 引物二聚體的出現(xiàn):引物設(shè)計(jì)不夠優(yōu)化:應(yīng)避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)。 4、引物濃度不佳:適當(dāng)降低引物的濃度,并注意上下游引物的濃度配比。在35循環(huán)后陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增屬正常情況,可配合熔解曲線進(jìn)行分析。

PCR反應(yīng)陰性對(duì)照出現(xiàn)明顯擴(kuò)增

1 反應(yīng)體系組分(如水)被污染:實(shí)驗(yàn)過程中,更換新的Mix或者水重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
2 標(biāo)本間的交叉污染或產(chǎn)物污染:反應(yīng)體系在超凈工作臺(tái)內(nèi)配制,對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行嚴(yán)格的區(qū)分,減少氣溶膠污染;使用帶濾芯的槍頭。
3 引物二聚體的出現(xiàn):引物設(shè)計(jì)不夠優(yōu)化:應(yīng)避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)。
4、引物濃度不佳:適當(dāng)降低引物的濃度,并注意上下游引物的濃度配比。在35循環(huán)后陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增屬正常情況,可配合熔解曲線進(jìn)行分析。