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影響PCR特異性的因素分析
日期：2025-04-30 17:09
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摘要：
有許多因素可以影響PCR的特異性，在此我們作一歸納，供大家參考：
1、退火步驟的嚴(yán)格性：提高退火溫度可以減少不匹配的雜交，從而提高特異性。
2、減短退火時間及延伸時間可以減少錯誤引發(fā)及錯誤延伸。
3、引物二聚體是常見的副產(chǎn)品，降低引物及酶的濃度也可以減少錯誤引發(fā)，尤其是引物的二聚化。
4、改變MgCl2(有時KCl)濃度可以改進(jìn)特異性，這可能是提高反應(yīng)嚴(yán)格性或者對Taq酶的直接作用。
5、模板中如果存在次級結(jié)構(gòu)，例如待擴(kuò)增的片段易自行形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)時，可在PCR混合物中的4×dNTPs中加...
有許多因素可以影響PCR的特異性，在此我們作一歸納，供大家參考：
1、退火步驟的嚴(yán)格性：提高退火溫度可以減少不匹配的雜交，從而提高特異性。
2、減短退火時間及延伸時間可以減少錯誤引發(fā)及錯誤延伸。
3、引物二聚體是常見的副產(chǎn)品，降低引物及酶的濃度也可以減少錯誤引發(fā)，尤其是引物的二聚化。
4、改變MgCl2(有時KCl)濃度可以改進(jìn)特異性，這可能是提高反應(yīng)嚴(yán)格性或者對Taq酶的直接作用。
5、模板中如果存在次級結(jié)構(gòu)，例如待擴(kuò)增的片段易自行形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)時，可在PCR混合物中的4×dNTPs中加入7-脫氮-2’-脫氧鳥苷-5’-三磷酸（7-deaza-2’-deoxyguanosine-5’-trihosphate）(de7GTP)。用de7GTP與dGTP比例為3：1的混合物（150μmol/l de7GTP +50μmol/L dGTP）代替200μmol/l dGTP，則可阻非特異性產(chǎn)物的生成。