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RT-PCR 實(shí)驗(yàn)中逆轉(zhuǎn)錄酶三種活性介紹

日期:2025-04-28 18:12
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摘要: 逆轉(zhuǎn)錄酶是存在于 RNA 病毒體內(nèi)的依賴(lài) RNA 的 DNA 聚合酶。 RT-PCR 實(shí)驗(yàn)中的逆轉(zhuǎn)錄酶需要具有以下三種活性: 1. 依賴(lài) RNA 的 DNA 聚合酶活性:以 RNA 為模板合成 cDNA 的第1條鏈; 2. Rnase 水解活性:水解 Rnase 雜合體中的 RNA; 3. 依賴(lài) DNA 的 DNA 聚合酶活性:以一條 DNA 鏈為模板合成互補(bǔ)的雙鏈 DNA 在選擇逆轉(zhuǎn)錄酶時(shí),建議選擇無(wú) RNaseH①活性(RNaseH-)的逆轉(zhuǎn)錄酶。具有 RNaseH 活性的逆轉(zhuǎn)錄酶的 RNaseH 活性會(huì)與聚合酶活性競(jìng)爭(zhēng) RNA 模板與 DNA 引物(或 cDNA 延伸鏈)形成的雜合鏈,并降解...

逆轉(zhuǎn)錄酶是存在于 RNA 病毒體內(nèi)的依賴(lài) RNA 的 DNA 聚合酶。

RT-PCR 實(shí)驗(yàn)中的逆轉(zhuǎn)錄酶需要具有以下三種活性:

1. 依賴(lài) RNA 的 DNA 聚合酶活性:以 RNA 為模板合成 cDNA 的第1條鏈;

2. Rnase 水解活性:水解 Rnase 雜合體中的 RNA;

3. 依賴(lài) DNA 的 DNA 聚合酶活性:以一條 DNA 鏈為模板合成互補(bǔ)的雙鏈 DNA

在選擇逆轉(zhuǎn)錄酶時(shí),建議選擇無(wú) RNaseH①活性(RNaseH-)的逆轉(zhuǎn)錄酶。具有 RNaseH 活性的逆轉(zhuǎn)錄酶的 RNaseH 活性會(huì)與聚合酶活性競(jìng)爭(zhēng) RNA 模板與 DNA 引物(或 cDNA 延伸鏈)形成的雜合鏈,并降解雜合鏈中的 RNA 鏈。被 RNaseH 活性所降解的 RNA 模板不能再作為合成 cDNA 的有效底物,降低了 cDNA 合成的產(chǎn)量與長(zhǎng)度。