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PCR反應(yīng)液被污染應(yīng)對方法
日期：2025-04-30 04:56
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摘要：
PCR反應(yīng)液被污染應(yīng)對方法：
1. DNase I 法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室溫反應(yīng)30min后加熱滅活，然后加入模板和Taq聚合酶進(jìn)行正常PCR擴增。
2. 內(nèi)切酶法：選擇識別4個堿基的內(nèi)切酶（如MspI和TaqI等），可同時選擇幾種，以克服用一種酶只能識別特定序列的缺陷，室溫作用1h后加熱滅活進(jìn)行PCR。
3. 紫外照射法：未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液進(jìn)行紫外照射，注意事項與方法同上述UV照射法。
4. 尿嘧啶...
PCR反應(yīng)液被污染應(yīng)對方法：
1. DNase I 法：PCR混合液（未加模板和Taq聚合酶）加入0.5U DNase I，室溫反應(yīng)30min后加熱滅活，然后加入模板和Taq聚合酶進(jìn)行正常PCR擴增。
2. 內(nèi)切酶法：選擇識別4個堿基的內(nèi)切酶（如MspI和TaqI等），可同時選擇幾種，以克服用一種酶只能識別特定序列的缺陷，室溫作用1h后加熱滅活進(jìn)行PCR。
3. 紫外照射法：未加模板和Taq聚合酶的PCR混合液進(jìn)行紫外照射，注意事項與方法同上述UV照射法。
4. 尿嘧啶糖苷酶（UNG）法：用dUTP代替dTTP，使PCR產(chǎn)物中摻入大量dU。在再次進(jìn)行PCR擴增前，用UNG處理PCR混合液即可消除PCR產(chǎn)物的殘留污染。由于UNG在PCR循環(huán)中的變性一步便可被滅活，因此不會影響含dU的新的PCR產(chǎn)物。
總之，靈敏度越高的PCR反應(yīng)越容易出現(xiàn)PCR污染。采用適當(dāng)?shù)拇胧┫廴?，可以避免重?fù)實驗和浪費試劑，也使得實驗結(jié)果更加可靠而精準(zhǔn)。